Лабораторные по микробиологии. Окраска клеток микроорганизмов по Граму

ВЫСШИХ УЧЕБНЫХ ЗАВЕДЕНИЙ

В. Н. КИСЛЕНКО

ПРАКТИКУМ

ПО ВЕТЕРИНАРНОЙ

МИКРОБИОЛОГИИ

И ИММУНОЛОГИИ

Допущено Министерством сельского хозяйства РФ в

качестве учебного пособия для студентов высших

учебных заведений, обучающихся по специальности

«Ветеринария»

МОСКВА «КолосС» 2005

УДК 619: 579(075.8) ББК 48я73 К44

Редактор Т.С. Мояочаева
Рецензенты: доктор ветеринарных наук, профессор В. И. Плешакова (Ин­ститут веете

ринарной медицины Омского ГАУ); доктор ветеринарных наук, про­фессор IT . И. Ба

рышников (Институт ветеринарной медицины Алтайского ГАУ)

Кисленко В. Н.

К44 Практикум по ветеринарной микробиологии и иммуно­логии. - М.: КолосС, 2005.- 232 с. л.: ил. - (Учебники и учеб. пособия для студентов высш. учеб. заведений). ISBN 5-9532-0332-2

Практикум состоит из двух разделов. Раздел «Общая микробиология» содержит сведения о правилах работы в бактериологической лаборатории, описание основных микробиологических, генетических и иммунологичес­ких методов изучения микроорганизмов. В разделе «Возбудители инфек­ционных болезней» перечислены методы лабораторной диагностики, диф­ференциации возбудителей и дан перечень применяемых биопрепаратов.

Приведены методические указания к проведению практических заня­тий для преподавателей.

Прилагаются комплекты тестов на электронном носителе (CD-диске) по общей и частной микробиологии, иммунологии, а также по теоритичес­кому курсу.

Для студентов высших учебных заведений по специальности «Ветери­нария».

ВВЕДЕНИЕ

Основная задача ветеринарных лабораторий - установление точного диагноза болезней сельскохозяйственных животных, включая птиц, пушных зверей, рыб и пчел, а также проведение экспертизы мяса, молока и других пищевых продуктов животного и растительного происхождения. В лабораториях также выполня­ют научные работы, осуществляют производство некоторых био­стимуляторов, антибиотиков и др.

Материалом для лабораторных исследований служат кровь, моча, мокрота, молоко, фекалии, содержимое абсцессов (гной), полученные при жизни животного; кусочки паренхиматозных ор­ганов или других тканей после их гибели, пробы объектов окружа­ющей среды (вода, воздух, почва, корма, растения, смывы с пред­метов ухода). Материал в лаборатории исследуют бактериологи­ческими, серологическими, гистологическими, биохимическими, микологическими и токсикологическими методами, для чего дол­жны быть созданы необходимые условия (специально отведенные помещения, оборудование, микроклимат и др.).

Лаборатория занимает отдельное здание, расположение вдали от проезжих дорог. В ней должны быть приемное отделение, пато-логоанатомический, бактериологический, серологический, биохи­мический и вирусологический отделы, а также специальные по­мещения для термостатов, мытья посуды, автоклавная. В комнате для мытья посуды находятся столы, раковины, горячее и холодное водоснабжение, газовая или электрическая плита, стеллажи для вымытой посуды, вытяжной шкаф, эмалированные ванны, тазы и другие емкости, раствор кислоты в стеклянных сосудах для обезза­раживания пипеток, предметных стекол и другой посуды. Отдель­ное помещение отводят под бактериологическую кухню (средова-рочная), где готовят питательные среды для культивирования микроорганизмов, подготавливают посуду для стерилизации. Здесь же в шкафах хранят стерильную посуду и хорошо упакован­ные химические вещества, компоненты питательных сред.

Для выполнения работы в асептических условиях оборудуют специальные изолированные помещения - боксы (англ. box - ко­робка), состоящие из собственно бокса и предбоксника. Исполь­зуют также настольные боксы, предметы и воздух в которых обез­зараживают лампами УФИ, и ламинарные шкафы, где кроме это­го применяют активное удаление воздуха.

Лабораторных животных (белых мышей, морских свинок, бе­лых крыс, кроликов и др.) размещают в виварии. Как правило, в виварии содержат также здоровых баранов-доноров, кровь кото­рых используют для реакции связывания комплемента (РСК) и приготовления питательных сред. Зараженных лабораторных жи­вотных содержат в изолированном помещении.

Кроме того, в здании есть комнаты для специалистов, обслужи­вающего персонала, кабинет заведующего, библиотека, весовая, раздевалка, склад и др.

Чтобы поддерживать надлежащую чистоту, пол в комнатах по­крывают линолеумом или кафельной плиткой. Стены и потолки, как правило, гладкие (без карнизов и лепных украшений), с зак­ругленными углами, окрашенные в светлые тона масляной крас­кой. Потолки можно белить известью. Желательно стены облице­вать пластиком или плиткой от пола до потолка.

В лаборатории должны быть горячая и холодная вода, канализация, педальные ведра для мусора, которые ежедневно освобождают, моют и дезинфицируют, полотенца, мыло и дезинфицирующий раствор. В комнатах находится только самое необходимое оборудование: столы, шкаф для хранения мелкой аппаратуры, красок, реактивов, посуды, инструментов и т. п. Столы обычно устанавливают перед окнами. Они должны быть устойчивыми, удобными, высотой 80 см, с закраинкой. Поверхность столов покрывают пластиком или линолеумом, стеклом или белой специальной краской. На столе размещают микроскоп, а также необходимые предметы для бактериологической работы.

Бактериологический метод исследования, как правило, вклю­чает микроскопию, выделение и изучение свойств чистой культу­ры возбудителя болезни и заражение лабораторных животных (биологическую пробу). Результаты бактериологического анализа за подписью заведующего отделением или директора лаборатории сообщают только официальным лицам: ветеринарному врачу, зоо-инженеру, руководителю предприятия.

Оборудование микробиологической лаборатории.

получения дистиллированной воды (дистиллятор), центрифуги, технические и аналитические весы, аппаратура для фильтрования (фильтр Зейтца и др.), водяные бани, холодильники, аппарат для изготовления ватно-марлевых пробок, набор инструментов (бак­териологические петли, шпатели, иглы, пинцеты и др.), лабора­торная посуда (пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флако­ны, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки) и др.

В лаборатории выделено специальное место для окраски мик­роскопических препаратов, где находятся растворы специальных красителей, спирт, кислоты, фильтровальная бумага и др. Каждое рабочее место снабжено газовой горелкой или спиртовкой, бан­кой с дезинфицирующим раствором. Для повседневной работы лаборатория должна располагать необходимыми питательными средами, химическими реактивами, диагностическими препарата­ми и другими лабораторными материалами. В крупных лаборато­риях имеются термостатные комнаты для массового выращивания микроорганизмов, постановки серологических реакций.

Для выращивания, хранения культур, стерилизации лаборатор­ной посуды и других целей предназначена следующая аппаратура:

1. 
   Термостат. Аппарат, в котором поддерживается постоянная температура. Оптимальная температура для размножения многих микроорганизмов составляет 37 "С. Термостаты бывают воздушшными и водяными.
2. 
   Микроанаэростат. Аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях.
3. 
   Холодильники. Используют в микробиологических лабора­ториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, крови, сывороток, вакцин и прочих биологических препара­тов при температуре около 4 °С. Для хранения препаратов ниже 0°С предназначены низкотемпературные холодильники, в которых поддерживается температура -20 "С и ниже.
4. 
   Центрифуги. Применяют для осаждения микроорганизмов, эритроцитов и других клеток, разделения неоднородных жидкостей (эмульсии, суспензии). В лабораториях используют центрифуги с различными режимами работы.
5. 
   Сушильно-стерилизационный шкаф (печь Пастера). Пред­назначен для воздушной стерилизации лабораторной посуды и других материалов.
6. 
   Стерилизатор паровой (автоклав). Предназначен для стери­лизации паром под давлением. В микробиологических лаборато­риях используются автоклавы разных моделей (вертикальные, го­ризонтальные, стационарные, переносные).

Правила работы в микробиологической лаборатории.

Для уничтожения микроорганизмов в воздухе и на поверхнос­тях существуют различные способы дезинфекции.

Воздух в лаборатории частично очищают проветриванием. Вентиляция резко снижает численность микроорганизмов в воз­духе, особенно при значительной разнице температур снаружи и внутри помещения. Продолжительность проветривания не менее 30...60 мин.

Более эффективный и наиболее часто применяемый способ обеззараживания воздуха - воздействие ультрафиолетовым излу­чением (УФИ), обладающим высоким антимикробным действием и вызывающим гибель не только вегетативных клеток, но и спор микроорганизмов. Из-за слабой проникающей способности ульт­рафиолетовое излучение не проходит через обычное стекло и лег­ко поглощается частицами пыли. Поэтому для стерилизации вре­мя облучения составляет от 30 мин до нескольких часов в зависи­мости от степени загрязненности воздуха.

В качестве источника УФИ используют бактерицидные лампы (УФЛ). Излучателем в них служит электрическая дуга, возникаю­щая в парах ртути низкого давления и испускающая линейный спектр в ультрафиолетовой области, более 80 % энергии которого приходится на длину волны 2,5 нм.

Бактерицидная лампа представляет собой стеклянную трубку, вмонтированную между двумя электрическими контактами и включаемую в сеть через дроссель. Трубка изготовлена из специ­ального стекла, пропускающего все лучи с длиной волны 2,5 нм и задерживающего излучение с длиной волны короче 2 нм. Следует помнить, что УФИ вызывает острое воспаление роговицы глаз с характерным слезотечением и светобоязнью вскоре после облуче­ния. Поэтому для того чтобы прямые или отраженные ультрафио­летовые лучи не воздействовали на глаза, применяют защитные очки. В небольших помещениях при включенной бактерицидной лампе находиться нельзя.

Пол, стены и мебель в микробиологической лаборатории про­тирают растворами различных дезинфицирующих веществ. Обра­ботка пылесосом удаляет с предметов пыль и значительную часть микрофлоры. В качестве дезинфицирующих растворов чаще всего используют 0,5...3%-й водный раствор хлорамина. Особенно тща­тельно следует дезинфицировать поверхность стола, на котором проводится работа с микроорганизмами. Ее необходимо проти­рать дезинфицирующим раствором как перед началом работы, так и после окончания. На рабочем столе недопустимы лишние предметы. Все реактивы и растворы должны быть снабжены этикетка­ми и стоять на строго определенных местах. В лаборатории нельзя есть, пить, курить. Работать следует в халатах.

В лабораторных условиях микроорганизмы выращивают на плотных и в жидких питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы или чашки Петри. Посуду и питательные среды предварительно стерилизуют. Внесение клеток микроорганизмов в стерильную среду называют посевом, или инокуляцией. Посев (или пересев) микроорганизмов требует четкого соблюдения оп­ределенных правил, чтобы предохранить исследуемую культуру от загрязнения посторонними микроорганизмами.

Посевы микроорганизмов в стерильные среды лучше всего осу­ществлять в особых помещениях - боксах. Бокс представляет со­бой небольшую изолированную комнату, разделенную перегород­кой на две части. В основное рабочее помещение бокса входят че­рез тамбур, имеющий раздвижную дверь, что исключает резкое перемещение воздуха и, следовательно, занесение извне посто­ронней микрофлоры. Оборудование бокса включает стол с легко-моющейся поверхностью, стул, газовую или спиртовую горелки, бактерицидную лампу, укрепленную в специальном штативе или смонтированную на потолке бокса. В боксе удобно иметь подсоб­ный стол, на котором размешают необходимые во время работы предметы. Все оборудование бокса, его стены, пол и потолок пе­риодически моют и протирают дезинфицирующими растворами. Перед работой бокс облучают бактерицидной лампой в течение 40...60 мин.

После посева пробирки или другие сосуды, в которых выращи­вают микроорганизмы, помещают в термостаты, где с помощью терморегуляторов поддерживается постоянная температура. Посу­ду с культурами микроорганизмов, подлежащими утилизации, подвергают автоклавированию, чтобы убить клетки, и только пос­ле этого моют. В посуду с плотными средами заливают дезинфи­цирующий раствор, который через сутки удаляют, а посуду моют. Неаккуратное обращение с культурами микроорганизмов приво­дит к возникновению бактериального аэрозоля, представляющего опасность для здоровья сотрудников.

Все сотрудники лабораторий, а также кафедр микробиологии, аспиранты, студенты, приходящие на занятия и работающие в на­учно-студенческих кружках, прежде чем приступить к работе с за­разным материалом (культуры патогенных микробов, трупы экс­периментально зараженных животных, выделения больных жи­вотных, кровь и др.) обязаны ознакомиться и строго соблюдать следующие правила работы и техники безопасности в ветеринар­ных бактериологических лабораториях:

в помещение лаборатории входят только в специальной одеж­де: в халате, белой шапочке или косынке. Халат должен быть на­глухо застегнут, волосы убраны под шапочку;

в лабораторию нельзя проносить посторонние веши, продукты питания. Портфели и сумки складывают в специально выделен­ном месте;

в помещении лаборатории категорически запрещается прини­мать пищу, пить и курить;

каждому работнику (студенту) под определенным номером вы­деляют рабочее место, микроскоп и другие принадлежности;

на рабочем месте должно находиться оборудование только для выполнения конкретного задания. Обычно это набор красок, кол­ба с дистиллированной водой, сливная чашка, банки с чистыми и отработанными стеклами, бактериологическая петля, штатив, банка с дезинфицирующим раствором;

перед началом работы необходимо проверить наличие и ис­правность приборов, посуды, газовых горелок (спиртовок) и пр. О замеченных недостатках и неисправностях следует сообщить от­ветственному, а на учебных занятиях - преподавателю;

во избежание взрыва нельзя зажигать одну спиртовку (или га­зовую горелку) от другой; пользуются только спичками;

нельзя касаться проводов и контактных частей электросети ме­таллическими и другими предметами;

студенты без ведома преподавателя или обслуживающего пер­сонала не должны включать электроприборы и аппаратуру;

студенты приступают к выполнению задания только с разреше­ния преподавателя; ход работы должен строго соответствовать изучаемой методике;

каждый: сотрудник и студент должен соблюдать опрятность в работе, содержать в чистоте рабочее место и оборудование;

материал, используемый на учебных занятиях, принимают за особо опасный;

при распаковке материала, присланного для исследования, необ­ходимо соблюдать осторожность: банки снаружи обтирают дезинфи­цирующим раствором и ставят только на подносы или кюветы;

при исследовании поступившего материала и при работе с бак­териальными культурами соблюдают общепринятые в бактерио­логической практике технические приемы, исключающие воз­можность инфицирования работника;

в процессе изучения возбудителей инфекционных болезней студенты должны усвоить особенности правил техники безопас­ности при работе с конкретными возбудителями;

вскрытие трупов экспериментальных (лабораторных) живот­ных производят в специальной одежде на оборудованном столе с помощью необходимых инструментов, используя для этих целей кювету, залитую воском (или парафином). Инструменты после вскрытия на стол класть запрещается: их помещают в стакан с дез-раствором или обжигают над пламенем горелки;

при работе с жидким инфицированным материалом использу­ют резиновые баллоны, соединенные с пипеткой;

если в процессе работы патологический материал случайно по­пал на стол, его немедленно удаляют тампоном, смоченным де­зинфицирующим раствором. При попадании зараженного мате­риала на кожу, конъюнктиву, в ротовую полость принимают экст­ренные меры к обеззараживанию;

по окончании работы патологический материал, использован­ные культуры микроорганизмов, инструменты и поверхность сто­ла обеззараживают;

в конце занятия бактериальные культуры и другой материал студенты должны сдать преподавателю, а рабочее место привести в порядок. Выносить из лаборатории пробирки с культурами, пре­параты (мазки) и другие предметы категорически запрещается;

патологический материал и бактериальные культуры, необхо­димые для дальнейшей работы, оставляют на хранение в закрытом рефрижераторе или сейфе;

перед уходом из лаборатории необходимо снять халат, руки тщательно вымыть и обработать йодированным спиртом. Выхо­дить за пределы лаборатории в халатах запрещается;

соблюдение правил работы и техники безопасности на учебных занятиях по микробиологии контролируют дежурные. С техникой безопасности при работе на кафедре микробиологии студенты знакомятся на первом занятии, о чем расписываются в журнале.

Соблюдая перечисленные правила, сотрудник в лаборатории обеспечивает стерильность манипуляций и предупреждает воз­никновение внутри- и внелабораторного заражения.

Ведение лабораторных записей. Тетрадь для лабораторных работ служит документом, позволяющим контролиро­вать правильность полученных данных. В нее должны быть занесены сведения, имеющие отношение к выполнению данной работы. За­пись необходимо вести аккуратно, четко и в определенном порядке, например: 1) название опыта, дата его постановки и окончания; 2) объект исследования; 3) условия проведения опыта; 4) основной принцип используемого метода анализа; 5) результаты опыта.

Полученные результаты подробно описывают, цифровой мате­риал сводят в таблицы, если необходимо, в графики, диаграммы, рисунки. Каждая лабораторная работа должна заканчиваться соб­ственными наблюдениями и выводами, занесенными в рабочую тетрадь.

В процессе работы студенты овладевают техникой и методами микроскопирования, знакомятся с морфологией представителей различных групп микроорганизмов, осваивают подход к выделе­нию чистых культур и их идентификации, изучают влияние усло­вий и факторов среды обитания на рост и образование разнообраз­ных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов и знакомятся с некоторыми методами генетических исследований бактерий.

ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Глава I. Микроскоп и техника микроскопиропания
1. Светооптическая микроскопия
2. Микроскопия в темном поле
3. Фазово-контрастная микроскопия
4. Люминесцентная (флуоресцентная) микроскопия
Глава II. Общие представления о культивировании, технике посева и необходимом оборудовании для работы с микроорганизмами
Глава III. Методы приготовления препаратов микроорганизмов
Глава IV. Исследование микробной клетки
1. Формы клеток микроорганизмов
2. Строение клеток микроорганизмов (цитохимические методы исследования)
3. Окраска клеток микроорганизмов по Граму
4. Окраска спор у бактерий
5. Окраска капсул
6. Окраска жгутиков
7. Окраска ядерного вещества бактерий
8. Окраска включений клеток микроорганизмов
Глава V. Питание микроорганизмов
1. Значение отдельных питательных элементов
2. Приготовление питательных сред
3. Методы стерилизации
Глава VI. Учет численности бактерий и выделение чистой культуры
1. Учет численности бактерий в почве
2. Определение качественного состава бактерий
3. Учет численности микроорганизмов в воде и других жидкостях
4. Учет численности бактерий в воздухе
5. Выделение чистых культур бактерий
Глава VII. Определение вида бактерий
Глава VIII. Превращение микроорганизмами безазотистых органических веществ
Процессы брожения
1. Спиртовое брожение
2. Молочнокислое брожение
3. Маслянокислое брожение
4. Брожение пектиновых веществ
5. Брожение целлюлозы
6. Окисление клетчатки
7. Окисление жира
8. Окисление углеводородов
Глава IX. Превращение микроорганизмами органических и минеральных соединений азота
1. Аммонификация
2. Нитрификация
3. Денитрификация (нитратное дыхание)
4. Биологическая фиксация атмосферного азота
Глава X. Превращение микроорганизмами соединений серы, железа и фосфора
1. Превращение микроорганизмами соединений серы
2. Участие микроорганизмов в превращении железа
3. Превращение микроорганизмами соединений фосфора
СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Глава XI. Общий микробиологический анализ почвы
1. Методы исследований
2. Группы микроорганизмов, состав и приготовление питательных сред
3. Взятие средней почвенной пробы и подготовка образца к микробиологическому анализу
4. Приготовление почвенной суспензии
5. Учет различных групп микроорганизмов
6. Определение общего количества микроорганизмов в почве методом прямого счета под микроскопом
Глава XII. Изучение ценозов микроорганизмов
1. Метод обрастания стекол по Н. Г. Холодному
2. Изучение микробных ценозов в почве по методу Перфильева и Габе
3. Метод капилляров Перфильева в модификации Аристовской
4. Выявление микроорганизмов автохтонной группы, участвующей в разложении гумусовых веществ, по методу Виноградского в модификации Теппер
5. Выявление микроорганизмов, участвующих в разложении гумусовых веществ, по методу Теппер
Глава XIII. Определение биологической активности почвы
1. Определение биологической активности почвы по интенсивности разложения полотна (метод Мишустина, Вострова и Петровой)
2. Определение общей микробиологической активности почвы по выделению углекислого газа
3. Определение аммонифицирующей активности почвы
4. Определение аммонифицирующей активности микроорганизмов
5. Определение нитрифицирующей активности почвы
6. Определение денитрифицирующей активности почвы
7. Определение азотфиксирующей активности микроорганизмов
Глава XIV. Изучение бактерий корневой зоны растений и на корнях
1. Учет бактерий в ризосфере методом Красильникова
2. Учет ризосферной и корневой микрофлоры методом последовательных отмываний корней по Е. 3. Теппер
3. Выделение чистых культур клубеньковых бактерий, количественный учет в почве, определение их активности и вирулентности
Глава XV. Анализ бактериальных препаратов
Глава XVI. Микробиология кормов
1. Эпифитная микрофлора зерна и ее изменение при хранении корма
2. Анализ силоса
3. Дрожжевание корма
Глава XVII. Микрофлора молока и молочных продуктов
1. Бактериологический анализ молока
2. Методы выделения молочнокислых бактерий в чистую культуру
3. Знакомство с микрофлорой сливочного масла
Указатель литературы

Название: Микробиология, вирусология и иммунология полости рта
Царев В.Н.
Год издания: 2013
Размер: 81.64 МБ
Формат: djvu
Язык: Русский
Описание: Практическое руководство "Микробиология, вирусология и иммунология полости рта" под ред., Царева В.Н., рассматривает вопросы общие вопросы микробиологии и микрофлоры ротовой полости человека. Предста... Скачать книгу бесплатно

Название: Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. 2-е издание
Воробьев А.А.
Год издания: 2012
Размер: 32.73 МБ
Формат: pdf
Язык: Русский
Описание: Практическое пособие "Медицинская микробиология, вирусология и иммунология" под ред., Воробьева А.А., и соавт., рассматривает базовые разделы общей микробиологии а также иммунологии и вирусологии. Осв... Скачать книгу бесплатно

Название: Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии
Прозоркина Н.В., Рубашкина Л.А.
Год издания: 2012
Размер: 5.72 МБ
Формат: pdf
Язык: Русский
Описание: Учебное руководство "Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии" под ред., Прозоркина Н.В., и соавт., рассматривает основной материал общей микробиологии, вирусологии и иммунологии. Изложены исто... Скачать книгу бесплатно

Название: Руководство к практическим занятиям по микробиологии
Егоров Н.С.
Год издания: 1995
Размер: 2.04 МБ
Формат: djvu
Язык: Русский
Описание: В книге "Руководство к практическим занятиям по микробиологии" под ред., Егоров Н.С., освещены современные лабораторные диагностические методы в области вирусологии и микробиологии, рассмотрены идент... Скачать книгу бесплатно

Название: Микробиология с основами вирусологии
Колешко О.И., Завезенова Т.В.
Год издания: 1999
Размер: 8.71 МБ
Формат: djvu
Язык: Русский
Описание: В учебном руководстве "Микробиология с основами вирусологии" под ред., Колешко О.И., и соавт., рассмотрены общая микробиология с рассмотрением морфофизиологии бактерий, генетика бактерий, микрофлора б... Скачать книгу бесплатно

Название: Медицинская микробиология и иммунология
Воробьев А.А.
Год издания: 1999
Размер: 14.3 МБ
Формат: djvu
Язык: Русский
Описание: Учебное пособие "Медицинская микробиология и иммунология" под ред., Воробьева А.А., рассматривает основные разделы общей микробиологии а также иммунологии. Представлены исторические вехи развития микр... Скачать книгу бесплатно

Название: Медицинская микробиология, вирусология и иммунология
Воробьев А.А.
Год издания: 2004
Размер: 12.81 МБ
Формат: djvu
Язык: Русский
Описание: Учебное пособие "Медицинская микробиология, вирусология и иммунология" под ред., Воробьева А.А., рассматривает основные разделы общей микробиологии а также вирусологии и иммунологии. Представлены исто... Скачать книгу бесплатно

Название: Мікробіологічна діагностика бактеріальних інфекцій
Жданівський М.В., Щукін І.М., Слюсарев О.А., Ніколенко Ю.І.
Год издания: 2007
Размер: 6.72 МБ
Формат: djvu
Язык: Украинский
Описание: Учебное пособие "Мікробіологічна діагностика бактеріальних інфекцій" под ред., Жданівського М.В., и соавт., рассматривает микробиологическую диагностику группы бактериальных инфекций. Описана методика...

ПРЕДИСЛОВИЕ

В настоящем учебном пособии представлены лабораторные работы по микробиологии для студентов педагогических университетов по специальностям 1-02 04 01 Биология с дополнительными специальностями и 1-02 04 05-01 География. Биология.

Цель лабораторного практикума - углубление теоретических положений лекционного курса микробиологии и освоение методики микробиологического эксперимента. Пособие включает лабораторные работы по разделам курса: «Морфология и структурнофункциональная организация прокариот», «Физиология и метаболизм прокариот», «Рост и культивирование прокариот», «Систематика и классификация прокариот», «Экология прокариот». В конце каждой работы приводятся вопросы для закрепления теоретического и экспериментального материала. Приведенные работы рассчитаны на 4 часа.

В каждой из предлагаемых работ приведены список материалов

и оборудования, краткие теоретические объяснения, описание хода работы, рекомендации по оформлению результатов. Лабораторные работы содержат справочный материал, позволяющий студенту лучше уяснить содержание лабораторной работы.

Работы выполняются побригадно (2 человека). Выполнению работы предшествует ознакомление с теоретическими положениями и ходом работы, формулирование цели и задач исследования. Пользуясь пособием, студенты оформляют результаты эксперимента в соответствии с учебной картой занятия. Работы предусматривают самостоятельную формулировку выводов с обоснованием полученных результатов. Анализ записей и усвоение изучаемого материала контролируется преподавателем на каждом занятии.

ТРЕБОВАНИЯ К СОДЕРЖАНИЮ И ОФОРМЛЕНИЮ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ

1. Лабораторные работы оформляются в тетради каждым студентом индивидуально. Лабораторная тетрадь подписывается студентом до начала выполнения первой лабораторной работы.

2. Каждая лабораторная работа должна содержать следующие структурные элементы:

1. Наименование лабораторной работы.

2. Цель занятия.

3. Перечень необходимых материалов и оборудования.

4. Результаты и обсуждение: а) наименование задания.

б) указанный в разделе Учебная карта занятия экспериментальный материал, полученный ЛИЧНО студентом в ходе выполнения лабораторной работы.

5. Выводы.

Лабораторная работа, оформленная в соответствии с данными требованиями, представляется в конце КАЖДОГО ЗАНЯТИЯ на подпись преподавателю.

ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ РАБОТЕ В МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ

1. К работе в учебной микробиологической лаборатории допускаются лица после прохождения инструктажа по технике безопасности.

2. Запрещается входить в микробиологическую лабораторию в верхней одежде.

3. К занятию допускаются студенты только при наличии медицинского халата.

4. В микробиологическую лабораторию запрещено вносить пищу, питьевую воду, посторонние вещи. В лаборатории запрещается курить

и принимать пищу.

5. За каждым студентом закрепляется постоянное рабочее место (номер рабочего места записывается студентом на титульном листе лабораторной тетради).

6. На рабочем месте размещаются только необходимые для выполнения конкретной лабораторной работы оборудование и материалы.

7. Приступать к работе и перемещаться по лаборатории во время занятия только с разрешения преподавателя.

8. При работе с микроорганизмами соблюдать осторожность и придерживаться приемов, исключающих возможность инфицирования.

9. Запрещается прикасаться к микробным культурам руками.

10. Если микроорганизмы случайно попали на стол, следует немедленно удалить их тампоном, смоченным дезинфицирующим раствором. При работе с жидкой культурой пользоваться спецсредствами для забора микроорганизмов.

10. Не зажигать одну спиртовку от другой. Закрывать фитиль спиртовки колпачком между использованиями.

11. Соблюдать меры безопасности при обращении с электроприборами. Перед работой проверить исправность электрооборудования. Без разрешения преподавателя не включать электроприборы в сеть.

12. В конце работы привести в порядок рабочее место. Тщательно вымыть руки и обработать ватным тампоном с дезинфицирующим раствором. Халат сложить в полиэтиленовый пакет.

13. Выполнение правил техники безопасности контролируют дежурные студенты, которые также проверяют в конце занятия порядок рабочих мест.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1 МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРОКАРИОТ. МОРФОЛОГИЯ

ПРОКАРИОТ

Цель занятия. Ознакомиться с оборудованием рабочего места в микробиологической лаборатории, техникой безопасности при работе с микроорганизмами. Овладеть методиками приготовления основных микробиологических препаратов. Изучить морфологические формы бактерий на примере чистых культур микроорганизмов и микрофлоры полости рта.

Материалы и оборудование: инструкция по технике безопасности при работе с культурами микроорганизмов; журнал по технике безопасности; посевы микроорганизмов на чашках Петри, в пробирках со скошенным агаром; спички, карандаш по стеклу; вазелин; иммерсионное масло; микроскоп; микробиологическая петля с петледержателем; спиртовка; предметные стекла; покровные стекла; шпатель Дригальского; пипетка Пастера; пипетка стеклянная градуированная; прибор для окрашивания и промывания мазков; полоски фильтровальной бумаги.

1. Ознакомиться с оборудованием рабочего места и техникой безопасности при работе с микроорганизмами.

2. Изучить методы исследования микроорганизмов.

3. Овладеть методами приготовления микробиологических препаратов.

4. Изучить морфологические формы микроорганизмов.

5. Закрепить полученные знания при исследовании микрофлоры полости рта.

Задание 1. Ознакомиться с техникой безопасности при работе с микроорганизмами и оборудованием рабочего места в микробиологической лаборатории.

Работа в микробиологической лаборатории требует строгого соблюдения техники безопасности.

В Республике Беларусь и России по степени опасности для человека и окружающей среды выделено 4 группы возбудителей инфекционных заболеваний, более низкий номер группы означает возрастающий риск при выполнении лабораторных исследований.

I группа – возбудители особо опасных инфекций: чумы, натуральной оспы, геморрагических лихорадок (Ласса, Эбола и др.).

II группа – возбудители высококонтагиозных бактериальных, грибковых и вирусных инфекций: сибирской язвы, бруцеллеза, туляремии, холеры, сыпного тифа, бластомикоза, бешенства, СПИДа, гепатитов В и С и др., ботулотоксины и столбнячный токсин.

III группа – возбудители других инфекций: коклюша, столбняка, ботулизма, туберкулёза, трихомониаза, малярии, лейшманиоза, гриппа, полиомиелита, герпесвирусы и др.

IV группа – условно-патогенные (возбудители газовой гангрены, клебсиеллы, стафилококки, стрептококки, синегнойная палочка, некоторые кандиды и аспергиллы, аденовирусы, ротавирусы, энтеровирусы и др.) и непатогенные микроорганизмы.

На лабораторных занятиях студенты работают с непатогенными микроорганизмами. Однако необходимо помнить, что при посеве сапрофитных микроорганизмов из окружающей среды случайно может быть внесена и патогенная микрофлора.

Подготовка микробиологической лаборатории к работе. Для того чтобы снизить количество микроорганизмов в воздухе и на различных поверхностях, в лабораторных помещениях применяют различные способы дезинфекции .

Воздух в лаборатории наиболее просто дезинфицировать проветриванием. Продолжительная вентиляция помещения через форточку (не менее 30–60 мин) приводит к резкому снижению количества микроорганизмов в воздухе, особенно при значительной разнице в температуре между наружным воздухом и воздухом помещения. Более эффективный и наиболее часто применяемый способ дезинфекции воздуха – облучение ультрафиолетовыми лучами с длиной волны от 200 до 400 нм.

Рабочее место, где непосредственно проводится работа с культурами микроорганизмов, требует особенно тщательной обработки. Рабочий стол следует дезинфицировать не только до начала работы, но и после ее окончания. Для протирания поверхности стола можно использовать растворы лизола и хлорамина, а также 70%-ные (по объему) растворы изопропилового или этилового спиртов.

Для работы в учебной микробиологической лаборатории используется следующие оборудование:

1. Микроскоп. Биологический микроскоп (рис. 1) представляет собой оптический прибор, увеличивающий предметы в 40-1500 раз; состоящий из механической, оптической и осветительной систем. К механической системе микроскопа относятся подковообразная ножка, тубусодержатель, тубус, предметный столик, винты. Оптическая система включает объективы и окуляр. Осветительная система состоит из конденсора с диафрагмой и зеркала.

микроскопа. В верхнюю часть тубуса вставлен окуляр, а в нижнюю – вращающийся вокруг своей оси револьвер, в который ввинчены объективы. Тубус передвигается вверх и вниз при помощи макрометрического и микрометрического винтов. Один оборот микрометрического винта передвигает тубус на 0,1 мм. Поэтому микровинтом пользуются для более точной наводки, а для предварительной - макровинтом. Предметный столик предназначен для размещения исследуемого материала.

Рисунок 1 - Микроскоп

1 - макровинт;2 - тубусодержагель;3 - шарнирное соединение;4

- предметный столик; 5 - тубус;6 - окуляр; 7- револьвер;8 - объективы;9 - конденсор;10 - зеркало;11 - микровинт;12 -

подковообразное основание Конденсор состоит из линз, собирающих отраженные от зеркала

лучи в световой пучок, и направляющих его через отверстие предметного столика на препарат. При определении подвижности неокрашенных препаратов конденсор должен быть несколько опущен.

Диафрагма находится между зеркалом и кондесором и служит для регулирования количества света, поступающего в конденсор.

Объектив состоит из системы линз, заключенных в металлическую оправу. Передняя линза служит для увеличения предмета, остальные - для коррекции изображения. Современные биологические микроскопы имеют не менее трех объективов. Сухие объективы увеличивают в 8 и 40 раз (между объективами и препаратом находится слой воздуха), иммерсионные - в 90 раз. На оправу каждого объектива нанесена цифра, указывающая увеличение.

Окуляр состоит из верхней - глазной и нижней - собирательной линз. На верхней части окуляра имеется цифра, указывающая увеличение (7, 10, 15). Окуляр увеличивает только изображение. Общее увеличение микроскопа складывается из произведения увеличения объектива на увеличение окуляра.

Рабочий стол для микроскопирования препаратов желательно размещать у окна или оснащать источником света. Микроскоп устанавливают на рабочий стол к себе тубусодержателем примерно на 7-10 см от края. Вначале проводят настройку освещения, для чего зеркалом направляют пучок света от источника освещения в объектив с увеличением в 8 раз. При правильной настройке освещения поле зрения микроскопа должно быть в виде равномерно освещенного круга. После этого на предметный столик помещают исследуемый препарат, который закрепляют клеммами и рассматривают под микроскопом, пользуясь объективами с увеличением в 8, 40 или 90 раз.

При работе с объективами 8 и 40 тубус микроскопа осторожно опускают с помощью макрометрического винта, приближают объектив почти вплотную к препарату, но не касаются его. Наблюдают в окуляр, слегка приподнимая тубус тем же винтом до получения изображения. С помощью микрометрического винта проводят точную установку объектива до получения четкого изображения предмета.

Федеральное агентство по образованию

Государственное образовательное учреждение

«Иркутский государственный университет»

МАЛЫЙ ПРАКТИКУМ ПО МИКРОБИОЛОГИИ

Учебно-методическое пособие

Иркутск 2009

УДК 579(076.5)

Печатается по решению редакционно-издательского совета Иркутского государственного университета

Жилкина практикум по микробиологии: Учеб.-метод. пособие для студ. высш. учеб. заведений по специальностям «Микробиология», «Биология» и «Физиология».

6. Микробная масса не должна загрязнять руки, стол и окружающие предметы. Пролившуюся микробную взвесь обезвреживают, используя дезинфицирующие средства.

7. После окончания работы культуры сдают преподавателю, засеянные пробирки и чашки ставят в термостат.

8. Бактериологические петли, иглы, пинцеты и другие металлические предметы после соприкосновения с микроорганизмами прожигают в пламени спиртовки и ставят в специальный штатив.

9. Использованные предметные и покровные стекла, пипетки, шпатели и т. д. помещают в 3–5%-ный раствор карболовой кислоты или другие дезинфицирующие растворы.

10. Отработанные культуры в пробирках, чашках Петри и т. д. обезвреживают при помощи дезинфицирующих растворов в течение суток, затем посуду кипятят и моют.

11. Следует строго соблюдать личную гигиену – после окончания работы необходимо тщательно вымыть руки с мылом.

12. Необходимо соблюдать технику безопасности при работе с электроприборами и химическими реактивами.